注册 登录  
 加关注
   显示下一条  |  关闭
温馨提示!由于新浪微博认证机制调整,您的新浪微博帐号绑定已过期,请重新绑定!立即重新绑定新浪微博》  |  关闭

本草藏香

制药人的专业GMP空间

 
 
 

日志

 
 

菌种的复苏及传代  

2016-05-23 21:03:09|  分类: 工作【GMP知识】 |  标签: |举报 |字号 订阅

  下载LOFTER 我的照片书  |

4.1  菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料,在医学领域中,诊断制品的制备,菌苗的生产、微生物致病性研究,药物的抑菌试验及药品微生物检验等都有一套完整的菌种、微生物具有生命活力,在传代过程中易发生变异甚至死亡,因此菌种传代与保藏是一项重要的基础工作。

4.2  菌种代号   

国内药品微生物检验所用的菌种代号是CMCC(F)或CMCC(B)        

CMCC--中国医学菌种保藏中心   B——代表细菌,F——代表真菌。

 金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003

大肠杆菌CMCC(B)44102

枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501  

白色念珠菌CMCC(F)98001

黑曲霉CMCC(F)98003    

4.3 传代和接种   

4.3.1 菌种冻干粉复苏

4.3.1.1把冻干菌种管、灭菌1ml滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂斜面数支,移入接种室或净化台。

4.3.1.2 先用砂轮将冻干菌种安瓿瓶颈部挫出挫痕,再将冻干菌种管外壁用75%酒精擦洗消毒,稍干,用75%乙醇棉擦净,放在灭菌双碟内,待干。点燃酒精灯,将菌种管的封口一端在火焰上烧灼红热,用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基,滴在灼热的菌种管封口一端,是骤冷而炸裂。

4.3.1.3取灭菌镊子,在火焰旁,将炸裂的管口打开,放入灭菌双碟内,领取一只灭菌滴管,在火焰旁吸取营养肉汤少许,加至菌种管底部,将冻干菌搅动促使溶解,随即吸出管内菌液,分别接种至营养琼脂斜面及普通肉汤内,并将滴管及菌种管投入消毒液内,将已接种的营养肉汤及营养琼脂斜面进行培养。

4.3.2菌种斜面传代操作

4.3.2.1  培养基应新鲜制备,如斜面已无冷凝水者,不宜再使用。标签上注明菌种名及菌种编号。至冰箱取出的菌种斜面,应在室温放置约30分钟,待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。

4.3.2.2点燃酒精灯,用左手握住菌种斜面,将管口靠近火焰旁,右手拿接种棒后端,将接种环烧红30秒,随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼,往返通过3次。左手将管口在火焰上旋转烧灼,右手无名指,小指及掌部夹住棉塞,拨开棉塞,将接种环深入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下,稍冷却再移至菌苔上,刮去少量菌苔,随即取出接种环,并将菌种管口移至火焰旁。

4.3.2.3堵上棉塞,左手将菌种管放下,取营养琼脂斜面一支,照上述操作打开棉塞,将接种环深入管内至琼脂斜面的底部,由底向上,将接种环轻贴斜面的表面曲折移动,使细菌划在斜面的表面上。

4.3.2.4取出接种棒,在火焰旁将培养基管棉塞堵上,然后将接种过细菌的接种棒在火焰上烧灼灭菌。

4.4菌种的培养与保存  

4.4.1  大肠杆菌35-37摄氏度培养48小时      

金黄色葡萄球菌30-35摄氏度培养48小时  

枯草芽孢杆菌30-35摄氏度培养48小时   

白色念珠菌23-28摄氏度培养7天   

黑曲霉23-28摄氏度培养7天  

4.4.2  将培养物管自培养箱取出后放入冰箱(2-8摄氏度)保存,一般2个月转种一次。   

4.5  菌悬液的制备

4.5.1 取上述培养好的菌种斜面移入接种室或净化工作台,放置室温后,用接种环取菌苔少许接种至营养肉汤中(10ml/支,已灭菌),将已接种毕的细菌管置35-37摄氏度培养18-24小时,取出备用。一般于冰箱中保存可用两周。  

4.5.2 取上述培养好的营养肉汤菌悬液(浓菌液)1ml,加到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液混匀,为10-1,再取另一只刻度吸管吸取10-1菌液1ml加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中混匀,为10-2......以此类推,稀释至含活菌数在50-100个。用平板计数。

4.5.3 此稀释菌液用于试验后加阳性对照,可在一周内使用。

4.7 记录   

4.7.1 传代和接种使用后,应做好《菌种传代接种记录》。

4.7.2 菌悬液制备后,应做好《菌液制备使用记录》。

  评论这张
 
阅读(29)| 评论(0)
推荐 转载

历史上的今天

在LOFTER的更多文章

评论

<#--最新日志,群博日志--> <#--推荐日志--> <#--引用记录--> <#--博主推荐--> <#--随机阅读--> <#--首页推荐--> <#--历史上的今天--> <#--被推荐日志--> <#--上一篇,下一篇--> <#-- 热度 --> <#-- 网易新闻广告 --> <#--右边模块结构--> <#--评论模块结构--> <#--引用模块结构--> <#--博主发起的投票-->
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

页脚

网易公司版权所有 ©1997-2017